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生化试剂 >> 分子生物试剂及试剂盒 >> 核酸分离与纯化
 

通用基因组DNA提取试剂盒

Cas  号:

 
分子式:  
订货信息:
货号 品名 规格 包装 单价 货期 库存
1227173311 通用基因组DNA提取试剂盒 50T 询价 现货 3天
1227173309 通用基因组DNA提取试剂盒 100T 询价 现货 3天
提示信息:偏远地区如新疆西藏宁夏甘肃等地可能无法运送液体,下单前请联系客服。
性 状: 试剂盒内容:50T  100T
RNase A 1ml 1ml×2
蛋白酶K 1ml 1ml×2
溶液A 25ml 50ml
溶液B 25ml 50ml 
漂洗液 15ml 15ml×2
洗脱液 15ml 30ml 
吸附柱 50个 100个
收集管 50个 100个
说明书 1份 1份
质量标准: 产品简介:

本试剂盒为通用型,适合于从土壤,粪便,昆虫,以及其他样本中提取基因组DNA。对细菌,真菌,昆虫等样本都具有很好的裂解效果,最大限度的保留了生物DNA的多态性。

使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交等实验。

操作步骤:

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、样品的处理:

      1)土壤:称取0.1-0.3g (根据干湿)土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3 次,使土壤颗粒研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。

      2)粪便:称取0.1-0.3g (根据干湿) 粪便,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。

      3)昆虫:称取0.1-0.3g昆虫,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,使昆虫研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。

      4)未知样品,如为细未状,可直接称取0.1-0.3g(根据干湿)加500ul溶液A,如为块状,可0.1-0.3g用液氮研磨成粉未,再加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。

2、向悬浮液中加入20ul的RNase A(10mg/ml),55℃放置10min。

3、加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分混匀,55℃水浴消化,30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次,12000转离心10min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。

4、加入500ul溶液B,充分混匀。如出现白色沉淀,于55℃放置5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的DNA量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。

5、加入500ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,放置2min (分两次加入,每次700ul)。

6、12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中

9、12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

10、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心2min。

11、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。

注意事项:

1、由于样品不同,最终提取的DNA含量和纯度也有所不同,一般来说,如果所提取DNA用电泳的方法检测不到,PCR会有结果,样品尽可能的新鲜。否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

2、若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。

3、如果样品消化不彻底,后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况,可适当延长离心时间。

4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率;DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

5、DNA浓度及纯度检测(浓度较高时):得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰, OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

贮 存: 室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。开封后请将RNase A,蛋白酶K

于-20℃保存。

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